|
Title
|
طراحی و ساخت وکتور نوترکیب pET28 (a)-merB به منظور
پاکسازی زیستی جیوه آلی
|
|
Type of Research
|
Article
|
|
Keywords
|
جیوه آلی، ژن کاهنده جیوه آلی، وکتور نوترکیب، زیست پالایی
|
|
Abstract
|
متیل جیوه یکی از فرم های پایدار جیوه آلی است که می تواند وارد زنجیره غذایی موجودات زنده گردد و خطرات زیست محیطی جبران ناپذیری را برای اکوسیستم طبیعی بوجود آورد. پایداری جیوه و هزینه زیاد روش های مرسوم پالایش عوامل نگران کننده ای هستند. در این رابطه، روش های بیولوژیکی مانند استفاده از بیوراکتورهای مبتنی بر باکتری ها یا آنزیم های آنها به عنوان یکی از روشهای میکروب پالایی راه حلی پایدار، کم هزینه و دوست دار محیط زیست ارایه می دهد. در این پژوهش ژنهای merB از باکتری های مناطق آلوده به جیوه جداسازی شده و سپس جهت کلونینگ در وکتور بیانی، با آنزیم های NcoI / NdeI برش داده شد و پس از خالص سازی، به وکتور بیانی PET28 a+ لیگاسیون صورت گرفت. وکتور نوترکیب PET28a+_merB به باکتری E.coli سویه TOP10 منتقل و در آن تکثیر شد. سپس واکنش زنجیره ای پلیمراز روی کلنی های رشد یافته در محیط گزینشی کانامایسین انجام شد. واکنش زنجیره ای پلیمراز روی پلاسمید با پرایمرهای اختصاصی ژن و هضم آنزیمی و ارسال پلاسمید برای تعیین توالی انجام شد. نتایج به دست آمده صحت همسانه سازی ژن های merB را در وکتور بیانی نشان داد. این وکتور نوترکیب به منظور بیان پروتئین مورد نظر به باکتری E. coli سویه BL21(DE3) منتقل و بیان پروتئین مورد نظر با کاربرد روش SDS-PAGE تایید شد. در نهایت عملکرد پروتئین های merB در محیط حاوی جیوه بررسی و نتایج بیانگر افزایش مقاومت به جیوه در باکتری های نوترکیب به دست آمده بود. به کمک این سیستم و با تولید آنزیم merB می توان از طریق روش های مختلف زیست پالایی اقدام به پاکسازی جیوه از مناطق آلوده نمود.
|
|
Researchers
|
Alireza Tarinejad (First Researcher)، (Second Researcher)، aryam Farshbaf Benam (Third Researcher)، Mohammad Pazhang (Fourth Researcher)
|