|
Title
|
همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس PVX در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان
|
|
Type of Research
|
Article
|
|
Keywords
|
PVX، Coat protein، بیان پروتئین، همسانه سازی، حامل دارو
|
|
Abstract
|
استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروسها با استفاده از آنتی بادیهای اختصاصی نیز اهمیت ویژه ای برای کنترل بیماریهای گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیبزمینی دارد. یکی از مهمترین ویروسهای سیب زمینی (PVX) Potato X Potexvirus با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی میباشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره های PVX، ژن Coat protein (CP) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش RT-PCRبا استفاده از آغازگرهای اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp 714 را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید pGBKT7 توسط آنزیمهای BamHIو EcoRI برش داده شدند و پس از خالص سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGBKT7 -CPPVX با الکتروپوراسیون به باکتری E. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتریهای حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالی یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن CP در پلاسمید بیانیpET-21a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه BL21 باکتری E. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئینهای باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالصسازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.
|
|
Researchers
|
Leyla Pourhang (First Researcher)، Maghsoud Pazhouhandeh (Second Researcher)، Akbar shirzad (Third Researcher)
|