|
Title
|
بیان هترولوگ ژن پروتئین پوششی ویروس موزائیک گل کلم در E. coli و تشکیل ذرات شبه ویروسی
|
|
Type of Research
|
Article
|
|
Keywords
|
بیان پروتئین، ژن پوشش پروتئینی، ذرات شبه ویروس، ویروس موزائیک گل کلم، همسانه سازی
|
|
Abstract
|
ویروس موزائیک گل کلم (Cauliflower Mosaic Virus= CaMV)نخستین ویروس گیاهی شناسایی شده دارای ژنوم DNA است که خسارت اقتصادی زیادی به گیاهان خانواده Brassicaceae وارد می کند. تولید موفق کپسیدهای این ویروس هم در تشخیص سرولوژیکی آن و هم در تشکیل ذرات شبه ویروسی Virus-Like Particles = VLPs مفید است. در این تحقیق، DNA نمونه های گل کلم دارای علایم مشکوک به ویروس، استخراج و ژن پروتئین پوششی (Coat protein= CP) ویروس توسط آغازگرهای اختصاصی در PCR تکثیر شد. سپس توسط آنزیمهای برشی BamHI و SmaI در وکتور بیانی pGEX2TKدر پایین دست GST وارد و بعد از تایید وکتور نوترکیب، توالی یابی انجام شد و توالی بدست آمده در پایگاه داده NCBI با برنامه BLASTn با توالیهای موجود در بانک ژن مقایسه شد و مشخص گردید که این توالی مربوط به ویروس CaMV با شماره دسترسی KF357590.1 در پایگاه NCBI است. بیان پروتئین CP در باکتری E. coli سویه Rosetta القاء و بهینه سازی شد. بیان بسیار بالای این پروتئین در دمای 37 درجه سانتیگراد و شش ساعت پس از القا به کمک IPTG با غلظت نهایی 1mM بدست آمد. سپس این پروتئین با نانوذرات سفاروز که توانایی اتصال به GST را دارند خالصسازی و در SDS-PAGE مشاهده شد. پروتئینهای خالص شده CP با میکروسکوپ الکترونی بررسی شد و ذرات شبه ویروسی (VLPs) مشاهده گردید. تصاویر مربوط به میکروسکوپ الکترونی تولید VLPs این ویروس را بدون ایجاد اینکلوژن بادی و با مونتاژ صحیح تائید میکند که میتواند در حمل دارو در پزشکی مورد آزمایش قرار گیرد.
|
|
Researchers
|
(First Researcher)، Maghsoud Pazhouhandeh (Second Researcher)، Akbar shirzad (Third Researcher)، - - (Fourth Researcher)
|