مشخصات پژوهش

عنوان	بیان هترولوگ ژن پروتئین پوششی ویروس موزائیک گل کلم در E. coli و تشکیل ذرات شبه ویروسی
نوع پژوهش	مقاله چاپ شده
کلیدواژه‌ها	بیان پروتئین، ژن پوشش پروتئینی، ذرات شبه ویروس، ویروس موزائیک گل کلم، همسانه سازی
چکیده	ویروس موزائیک گل کلم (Cauliflower Mosaic Virus= CaMV)نخستین ویروس گیاهی شناسایی شده دارای ژنوم DNA است که خسارت اقتصادی زیادی به گیاهان خانواده Brassicaceae وارد می کند. تولید موفق کپسیدهای این ویروس هم در تشخیص سرولوژیکی آن و هم در تشکیل ذرات شبه ویروسی Virus-Like Particles = VLPs مفید است. در این تحقیق، DNA نمونه های گل کلم دارای علایم مشکوک به ویروس، استخراج و ژن پروتئین پوششی (Coat protein= CP) ویروس توسط آغازگرهای اختصاصی در PCR تکثیر شد. سپس توسط آنزیمهای برشی BamHI و SmaI در وکتور بیانی pGEX2TKدر پایین دست GST وارد و بعد از تایید وکتور نوترکیب، توالی یابی انجام شد و توالی بدست آمده در پایگاه داده NCBI با برنامه BLASTn با توالیهای موجود در بانک ژن مقایسه شد و مشخص گردید که این توالی مربوط به ویروس CaMV با شماره دسترسی KF357590.1 در پایگاه NCBI است. بیان پروتئین CP در باکتری E. coli سویه Rosetta القاء و بهینه سازی شد. بیان بسیار بالای این پروتئین در دمای 37 درجه سانتیگراد و شش ساعت پس از القا به کمک IPTG با غلظت نهایی 1mM بدست آمد. سپس این پروتئین با نانوذرات سفاروز که توانایی اتصال به GST را دارند خالصسازی و در SDS-PAGE مشاهده شد. پروتئینهای خالص شده CP با میکروسکوپ الکترونی بررسی شد و ذرات شبه ویروسی (VLPs) مشاهده گردید. تصاویر مربوط به میکروسکوپ الکترونی تولید VLPs این ویروس را بدون ایجاد اینکلوژن بادی و با مونتاژ صحیح تائید میکند که میتواند در حمل دارو در پزشکی مورد آزمایش قرار گیرد.
پژوهشگران	مهین پوراسمعیل (نفر اول)، مقصود پژوهنده (نفر دوم)، اکبر شیرزاد (نفر سوم)، احمد یاری خسروشاهی (نفر چهارم)