|
عنوان
|
بررسی عوامل محیطی بر محلول سازی آنتی بادی تک زنجیره ای
|
|
نوع پژوهش
|
پایان نامه
|
|
کلیدواژه‌ها
|
آنتی بادی تک زنجیره ای ، بیان پروتئین نوترکیب، اینکلوژن بادی، اشرشیاکلی، فاکتور نکروز دهنده توموری آلفا
|
|
چکیده
|
مقدمه:بیان آنتی بادی تک زنجیره ای(scFv)به عنوان جایگزین آنتی بادی های کامل علیه فاکتور نکروز دهنده توموری آلفا طراحی گردید، که موجب بیان پروتئین های در هم تنیده ایی به نام اینکلوژن بادی گردید. هدف از این مطالعه بررسی شرایط متفاوت کشت باکتریایی، جهت دستیابی به بیان محلول آنتی بادی تک زنجیره ای علیه فاکتور نکروز دهنده توموری آلفادر اشرشیاکلیتعیین گردید. روش ها:به منظور اجتناب از تولید اینکلوژن بادی، اثرات القاگر هایIPTG یا لاکتوزبا غلظت های مختلف، زمان های انکوباسیون، دما، فرایند هایهمزدن(shaking)، افزودنی های محیطی (منیزیم و ساکاروز)، pH، شوک اسمزی و اسمزی حرارتیمورد بررسی قرار گرفت. نمونه های رشد باکتریایی با نتایج امیدوارکننده از بیان محلول GST-hD2 با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی تخلیص و توسط الکتروفورز پروتئینی و پردازش تصاویر مورد ارزیابی قرار گرفتند.
نتایج:نتایج نشان داد که کشت در محیط کشت LB و القا با mM3/0لاکتوز به مدت 48 ساعت در دمای °C 10، سبب بیانGST-hD2 به میزان15/25 میکروگرم به ازای گرم باکتری به فرم محلول گردید.همچنین، کشت در حضور کلرید منیزیم با غلظتmM 10 و انکوباسیون به مدت 6 و 15 ساعت به ترتیب سبب بیان فرم محلول GST-hD2به مقدار 21/25 و µg92/13 به ازای گرم باکتری گردید.همچنین شوک اسمزی منجر به بیان محلول GST-hD2به مقدارµg 78/5به ازای گرم باکتری گردید. به علاوهافزودن ساکاروز M 4/0یا سوربیتول M 5/0 به محیط کشت LB، به ترتیب سبب سرکوب کامل بیان پروتئین نوترکیبو کاهش رشد باکتریایی گردید.
نتیجه گیری:به طور کل می توان نتیجه گرفت که دمای پایین محیط کشت در حضور غلظتهای پایین القاگر در مدت زمان طولانی یا افزودن منیزیم به محیط کشت کاراترین عناصر محیطی مطالعه شده جهتحداکثر محلول سازی پروتئین نوترکیب (GST-hD2)می باشند. همچنین شوک اسمزی موجب بیان بسیار جزئی در فرم محلول پروتئین نوترکیب گردید. سایر عناصر محیطی مطالعه شده تاثیر قابل توجهی بر بیان محلول پروتئین نوترکیب دیده نشد.
|
|
پژوهشگران
|
محمد سینا (دانشجو)، سیاوش دستمالچی (استاد راهنما)، داود فرج زاده (استاد راهنما)
|