|
عنوان
|
بهینه سازی فعالیت آنزیم اندوگلوکاناز Cel9A از باکتری آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس با روش رویه پاسخ (RSM)
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله چاپ شده
|
|
کلیدواژه‌ها
|
آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس، اندوگلوکاناز، تخلیص پروتئین، روش رویه پاسخ، بهینه سازی فعالیت.
|
|
چکیده
|
آنزیم اندوگلوکاناز
گرمادوست بوده و پیوندهای بتا 1 به 4 را در مولکول سلولز به طور اتفاقی هیدرولیز کرده و الیگوساکاریدهایی
جهت بیان AaCel9A حاوی ژن آنزیم pDEST با سرهای احیا کننده تولید میکند. در این تحقیق ابتدا وکتور 17
منتقل شده و بعد از بیان، با استفاده از ستون (BL پروتئین نوترکیب به میزبان مناسب (اشریشیا کلی سویه 21
دما و کلسیم بر روی فعالیت و پایداری آنزیم، با ،pH نیکل آگارز خالص شد. سپس با توجه به تأثیرگذاری
SDS- استفاده از این سه متغییر فعالیت آنزیم با استفاده از روش رویه پاسخ بهینه گردید. نتیجه الکتروفورز ژل
نشان داد که آنزیم نوترکیب در حدود 59 کیلودالتون وزن مولکولی داشته و به خوبی بیان و خالص شده PAGE
بر روی فعالیت آنزیم بیشتر از دما، و دما بیشتر از کلسیم pH است. نتایج روش رویه پاسخ نشان داد که تأثیر
4/ 64/5° و غلظت کلسیم برابر با 92 C دمای ،pH 6/ در محیط با 35 AaCel9A بوده و بهینه شرایط فعالیت آنزیم
مولار است. در نهایت با توجه به همبستگی بالای نتایج آزمایشگاهی و نتایج پیش بینی شده می توان گفت مدل
پیشنهادی در این تحقیق برای پیش بینی شرایط بهینه فعالیت آنزیم از صحت بالایی برخوردار است.
|
|
پژوهشگران
|
محسن اکبریان (نفر اول)، محمد پاژنگ (نفر دوم)، علیرضا امانی قدیم (نفر سوم)، فرشته سادات یونسی (نفر چهارم)، حسین زارعی (نفر پنجم)
|