مشخصات پژوهش

عنوان	کلونینگ و بیان آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس در اشریشیا کلی
نوع پژوهش	مقاله چاپ شده
کلیدواژه‌ها	نقرس، اوریکاز سنتتیک، آسپرژیلوس فلاوس، نوترکیب، اشریشیا کلی
چکیده	زمینه و هدف اوریکاز (EC 1.7.3.3) آنزیمی است که باعث کاتالیز اوریک اسید به H2O2 و الانتوئین می شود و در درمان نقرس استفاده می شود. هدف این تحقیق کلون سازی ژن سنتتیک کدکننده آنزیم اوریکاز آسپرژیلوس فلاوس در پلاسمید pET-28a(+) و بیان نوترکیب آن در اشریشیا کلی می باشد. روش بررسی بعد از استخراج توالی ژنی از پایگاه داده ها، ژن کدکننده اوریکاز بهینه سازی شد و سنتز آن سفارش داده شد. سپس ژن سنتتیک در پلاسمیدpET-28a(+) در بین آنزیم های NcoI و XhoI ساب-کلون شد و توسط روش های هضم آنزیمی، PCR و تعیین توالی کلون سازی صحیح آن تایید شد. بعد از انتقال آن به باکتری Bl21 به روش شیمیایی والقا آن توسط IPTG، بیان آن بهینه سازی شد. برای ارزیابی القا آنزیم نوترکیب، ژل الکتروفورز پروتئین استفاده شد. یافته ها نتایج حاصل از هضم آنزیمی، PCR و تعیین توالی نشان داد که آنزیم اوریکاز بطور صحیح در جایگاه مورد نظر کلون سازی شده است. دمای °C 22، و زمان 6 ساعت با غلظت IPTG mM1 برای بهینه سازی بیان آنزیم بدست آمد. نتایج الکتروفورز آنزیم نوترکیب، جرم مولکولی 5/34 کیلو دالتون را برای آنزیم بیان شده نشان داد. تعیین فعالیت آنزیمی نشان داد که فعالیت ویژه آنزیم اوریکاز U/mg 69/7 است و آنزیم به لحاظ عملکردی فعال است. نتیجه گیری نتایج پژوهش حاضر نشان داد که ژن اوریکاز را می توان به آسانی در سیستم بیانی pET کلون و بیان کرد. نتایج تعیین فعالیت ویژه نشان داد که پروتئین آنزیمی به صورت محلول در سیتوزول اشریشیا کلی تولید شده است و از نظر کاتالیتیکی فعال است.
پژوهشگران	مهدی ایمانی (نفر اول)، محمد پاژنگ (نفر دوم)، سمیه میرزایی نیا (نفر سوم)