مشخصات پژوهش

عنوان	بیان و تخلیص آنزیم اندوگلوکاناز AaCel9A و بررسی پایداری آن در شرایط مختلف
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	سلولاز، تثبیت، آنزیمAaCel9A ، ماکروبید کیتوزان، پایداری
چکیده	با افزایش روز افزون جمعیت، استفاده از منابع تجدید پذیر جهت تولید محصولات و سوخت‏ های زیستی اهمیت فراوانی دارد. سلولز فراوان ‏ترین پلیمر زیستی است که سالانه حدود180میلیارد تن طی فتوسنتز تولید می شود. استفاده از این منبع غنی سلولزی نیازمند به کارگیری فرآیند های شیمیایی و بیولوژیکی است. باتوجه به صرفه اقتصادی و آلایندگی کمتر هیدرولیز زیستی، اهمیت کاتالیزور های زیستی نظیر سلولاز به طور گسترده مورد مطالعه قرار می گیرد. سلولاز در صنعت منسوجات، شوینده ها، کاغذ سازی، تولید سوخت های زیستی و زیست پالایی کاربرد های گسترده ای دارد. باتوجه به کاربرد های گسترده آن، تولید ارزان و افزایش پایداری آنزیم در شرایط مختلف (دمای بالا، pH های مختلف، حضور شوینده ها و افزاینده‏های شیمیایی) اهمیت بسزایی دارد. آنزیم ها در طیف کوچکی از دما و pHفعالیت کاتالیزوری خود را انجام می دهند. با استفاده از یکسری روش ها از جمله تثبیت آنزیم بر روی بستر مناسب، می توان پایداری آنزیم را در شرایط صنعتی بهبود بخشید. علاوه برآن، استفاده از تکنیک تثبیت امکان جدا سازی آنزیم از واکنش و استفاده مجدد آنزیم را تا چندین بار ممکن می کند. تکنیک های متفاوت و استفاده از بستر های متنوعی در تثبیت مطرح می شود. بسته به نوع بستر و تکنیک انتخابی برای تثبیت، ویژگی های متفاوتی در ساختار و عملکرد آنزیم القا می شود. هدف از انجام طرح، بررسی پایداری آنزیم اندوگلوکاناز AaCel9A با تثبیت آن بر روی بستر پلیمریک کیتوزان است. در اینجا ابتدا توالی ژنی کد کننده آنزیم AaCel9A در وکتور بیانی pET21a(+) همسانه سازی شد. پس از تائید کلونینگ با تعیین توالی، القای بیان توسط القاگر IPTG و سپس تولید آنزیم AaCel9A از طریق سیستم بیان پروکاریوتی صورت گرفت. تخلیص آنزیم به کمک ستون تمایلی نیکل آگارز انجام شد. تثبیت آنزیم برروی ماکروبید های سنتز شده کیتوزان بواسطه فعال سازی بستر با لینکر گلوتارآلدئید صورت گرفت. بررسی پارامتر های سنتیکی برای آنزیم آزاد و تثبیت شده، مؤید افزایش Km آنزیم تثبیت شده نسبت به شکل آزاد آنزیم بود. آنزیم تثبیت شده پایداری نسبتاً زیادی در دما های بالا و مدت زمان-های طولانی تر نشان داد. هم چنین حفظ فعالیت بالاتری از آنزیم در حضور غلظت های متفاوت از دترژنت SDS مشاهده شد. با جداسازی آنزیم تثبیت شده از واکنش آنزیمی انجام واکنش آنزیمی تا 7
پژوهشگران	پرستو رحیمی زاده (دانشجو)، سعید نژاوند (استاد راهنما)