|
عنوان
|
زیست پالایی جیوه معدنی از طریق ساخت وکتور نوترکیب pET 21a(+)-merA
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله چاپ شده
|
|
کلیدواژه‌ها
|
زیست پالایی، جیوه، merA، وکتور نوترکیب.
|
|
چکیده
|
سابقه و هدف: ورود جیوه معدنی از طریق صنایع و کشاورزی به محیط زیست یکی از جدی ترین مشکلات زیست محیطی در کشور بحساب می آید. زیست پالایی توسط باکتری ها یکی از راهکارهای مناسب و عملی برای پاکسازی آلاینده ها از محیط محسوب می گردد که در آن از پتانسیل موجودات زنده در جهت حذف یا کاهش آلاینده ها استفاده می شود. جهت تجزیه ترکیبات معدنی جیوه، آنزیم MerA در باکتری ها وارد عمل می شود. بنابراین، تحقیق حاضر با اهداف ساخت وکتور نوترکیب حاوی ژن merA و بررسی بیان آن جهت پاکسازی جیوه اجرا گردید.
مواد و روش ها: ابتدا ژن merA از ژنوم باکتری مقاوم به جیوه جداسازی و در داخل وکتور بیانی pET21a(+) کلون گردید. صحت همسانه سازی ژن موردنظر از طریق PCR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. وکتور نوترکیب pET21a(+)-merA بدست آمده بدرون باکتری E. coli سویه BL21 کلون شد. جهت مشاهده افزایش مقاومت به جیوه معدنی در باکتری تراریخته و عملکردی بودن آنزیم تولیدی از وکتور نوترکیب، میزان رشد باکتری های E. coli سویه BL21حاوی وکتور نوترکیب به همراه باکتری های E. coli سویهBL21 فاقد ژن merA در محیط حاوی جیوه معدنی در طی 48 ساعت اندازه گیری شدند.
یافته ها : رشد باکتری اکولای حاوی وکتور نوترکیب در محیط حاوی جیوه در طی زمانها و غلظت های مختلف جیوه اندازه-گیری و نتایج نشان داد که رشد باکتری های E.coli حاوی وکتور بدون ژن هدف تا 12 ساعت بعد از ریختن جیوه به شدت تحت تاثیر محیط حاوی جیوه قرار گرفته و قادر به رشد در مقادیر 10 و ppm 20 جیوه نمی باشند، در حالی که باکتری های حاوی وکتور نوترکیب pET21a(+)-merA دارای قابلیت رشد خوبی در محیط حاوی جیوه بودند. SDS-PAGE پروتئین های باکتری حاوی وکتور نوترکیب روی ژل آکریل آمید 5/12 درصد نشان داد که بیشترین بیان پروتئین MerA (با اندازه kDa 62)، بعد از 16 ساعت القا با 1mM IPTG در دمای 37 درجه سانتی گراد بدست می آید.
نتیجه گیری: نتایج حاصل از توانایی رشد باکتری های E.coli حاوی وکتور نوترکیب، نشان دهنده عملکرد پروتئین MerA در باکتری های تراریزش شده می باشد. همچنین افزایش مقاومت باکتری نوترکیب به جیوه معدنی موجود در محیط بیانگر این موضوع است که می توان آلاینده های فلزات سنگین در محیط زیست را با مدیریت مناسب از طریق ساخت وکتور نوترکیب پاک سازی نمود.
|
|
پژوهشگران
|
حمیده باغی (نفر اول)، علیرضا تاری نژاد (نفر دوم)
|