|
عنوان
|
بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله چاپ شده
|
|
کلیدواژه‌ها
|
سویه Rosetta ، کریپتوکروم DASH1 ، وکتوربیانی، Volvox carteri
|
|
چکیده
|
اپتوژنتیک به عنوان یک شاخه علمی جدید، از فتورسپتورها بهمنظور اجرای تحقیقات پایهای و کاربردی استفاده میکند.
یکی از راههای توسعه اپتوژنتیک، شناسایی فتورسپتورهای جدید و تعیین خصوصیات آنهاست. کریپتوکرومهای DASH متعلق به
خانواده پروتئینی کریپتوکروم/فتولیاز، فتورسپتورهای دارای قابلیت ترمیم DNA بوده و در مسیرهای پیامرسانی علامت نقش دارند.
هدف این تحقیق، تولید کافی پروتئین پیشگوییشده کریپتوکروم DASH1 ولوکس ) VcCryDASH1 (، برای استفاده در
مطالعات طیف جذبی و نیز بررسی قابلیت ترمیم DNA میباشد. ابتدا توالی کدکننده پروتئین VcCryDASH1 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، از کتابخانه cDNA جلبک Volvox carteri جداسازی و در پلاسمید بیانی pGEX-2TK همسانه سازی شد. تولید پروتئین نوترکیب در دو سویه متفاوت باکتری E. coli و همچنین تحت تاثیر زمانهای مختلف القاء با IPTG و همچنین میزان انحلالپذیری آن توسط روش SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی قابلیت اتصال به DNA در این پروتئین، با روش همردیفسازی انجام شد.
تولید کافی پروتئین، در سویه Rosetta ، در °C32 ، و زمان القاء بیش از 3 ساعت بدست آمد. در زمان القاء 1 و 3 ساعت،
نیمی از پروتئین بهصورت نامحلول بود. همردیفسازی پروتئین VcCryDASH1 مشخص نمود که درصد بالایی از آمینواسیدهای
متصل شونده به DNA ، در این پروتئین حضور دارند. این نتایج نشان میدهند که پروتئین VcCryDASH1 تحت شرایط بهینه، دارای قابلیت انحلالپذیری دوگانه بوده اما روش ما میتواند مقدار کافی آن را در باکتری E. coli سویه Rosetta تولید کند. همچنین بدلیل داشتن آمینواسیدهای حفاظتشده، این پروتئین دارای قابلت اتصال به DNA میباشد که آن را بهعنوان یک منبع احتمالی جهت طراحی مولکولهای میانجی نور- DNA در اپتوژنتیک معرفی مینماید.
|
|
پژوهشگران
|
سعید مهدوی (نفر اول)، جعفر رازقی (نفر دوم)، مقصود پژوهنده (نفر سوم)، آرش کیانیان (نفر چهارم)، علی موافقی (نفر پنجم)
|