|
عنوان
|
بررسی الگوهای بیان (HtrA2 (A2 requirement temperature High در ردهها و بافتهای سلولی مختلف و تولید آن در میزبان پروکاریوتی
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله چاپ شده
|
|
کلیدواژه‌ها
|
HtrA2 ،آپوپتوز، کازئین، PAGE-SDS،بیان، فعالیت پروتئازی
|
|
چکیده
|
HtrA2 سرین پروتئاز میتوکندریایی است که تقریبا در همه بافتها بیان میشود و تحت شرایط استرسی این پروتئاز به یک
فاکتور پروآپوپتوزی تبدیل میشودو در القای آپوپتوز شرکت میکند. این پروتئین احتمالا دارای فعالیت چاپرونی نیز بوده و در
تاخوردن مناسب پروتئینها نقش دارد. باتوجه به اهمیت آنزیم HtrA2 در القای آپوپتوز و ارتباط آن با برخی بیماریها، الگوی
بیان پروتئین HtrA2در ردههای سلولی طبیعی و برخی ردههای بیماری بررسی شد. نتایج PCR نشان داد که ژن HtrA2 در
سلولهای طبیعی معده بیان می شود ولی در سلولهای سرطانی معده بیان نمی شود. هم چنین در سلولهای سرطانی ریه و
سلولهای آدنوکارسینومای کولون انسان (رده سلولی SW480 (نیز بیان دیده شد. با توجه به بیان متفاوت ژن HtrA2 در رده
های سلولی های طبیعی و بیماری، الگوی مشخصی که نشان دهنده ارتباط بیان این پروتئاز با بیماری باشد مشاهده نگردید. در
مرحله بعد با توجه به اهمیت HtrA2 ،قطعه cDNA مربوط به آنزیم HtrA2درون حامل (+)pET21a کلون و حاملنوترکیب به
سلولهای مستعد coli.E سویه TOP10 منتقل شدند. در نهایت بیان پروتئین توسط PAGE-SDS آنالیز شد. سپس پروتئین
تولید شده توسط ستون نیکل-آگارز خالصسازی شد و فعالیت پروتئازی آن توسط سوبسترای کازئین و با روش
اسپکتروفتومتری سنجیده شد. نتایج نشان داد که آنزیم تولید شده فعال است و بنابراین HtrA2 تولید شده ساختار طبیعی داشته
و می توان از آن در جهت تحقیقات بعدی استفاده نمود.
|
|
پژوهشگران
|
سمیرا شاطریان القلندیس (نفر اول)، سعید نژاوند (نفر دوم)، علی مطاع (نفر سوم)، محمد پاژنگ (نفر چهارم)
|