مشخصات پژوهش

عنوان	تولید گیاه توتون مقاوم به ویروس PVX با استفاده از مکانیسم RNA Silencing
نوع پژوهش	مقاله چاپ شده
کلیدواژه‌ها	توتون، PVX، مقاومت، گیاه تراریخته، RNA Silencing.
چکیده	یکی از مهم ترین ویروس های بیماری زای خانواده سولاناسه ویروس (PVX)Potato X virus می باشد که سبب ایجاد لکه های موزاییک سیستمیک در توتون (Nicotiana tabacum) و خسارت اقتصادی به آن می شود. بهترین روش مدیریت این بیماری استفاده از ارقام مقاوم توتون است. در این تحقیق جهت ایجاد گیاهان توتون مقاوم به PVX ابتدا سازه سنجاق سری قطعه ای 400 نوکلوتیدی از ژن P25 این ویروس که ممانعت کننده از RNA Silencing در گیاه است ساخته شد. برای این کار قطعه ژن P25 به روش PCR با آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در دو مرحله، در دو جهت سنس و آنتی سنس در ناقل pFGC5941 همسانه سازی شد. در مرحله بعد، سازه RNAi از روی این ناقل نوترکیب به واسطه آگروباکتریوم، به ریزنمونه های (قطعات برگ) گیاهان توتون رقم سامسون انتقال یافت و گیاهان تراریخته با گزینش روی محیط کشت حاوی بستا بدست آمده و پس از تکثیر مورد بررسی-های فنوتیپی و مولکولی قرار گرفتند. بررسی مولکولی با PCR روی DNA گیاهان وجود تراژن را تایید کرد. نسل بعدی گیاهان تراریخته در گلخانه به روش مکانیکی با PVX تلقیح شدند. نتایج ELISA با آنتی بادی اختصاصی پروتئین پوششیPVX مقاومت سه لاین تراریخته را نشان داد. تایید مولکولی این سه لاین مقاوم توتون به PVX با استفاده از RT-PCR روی RNA استخراج شده از گیاهان به کمک آغازگرهای CP ویروس انجام شد و ویروس در گیاهان تراریخت ردیابی نگردید. نتیجه این تحقیق منجر به تولید سه لاین مستقل توتون مقاوم به PVX شد که بررسی مقاومت آنها در شرایط مزرعه در حال انجام می باشد.
پژوهشگران	محسن سجادی فرد (نفر اول)، مقصود پژوهنده (نفر دوم)، اکبر شیرزاد (نفر سوم)، هانیه محجل شجاء (نفر چهارم)